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發(fā)布時間:2014/7/10 閱讀:2039次 【字體: 】 【背景色 -              
  SDS是陰離子去污劑,作為變性劑助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后,分子被解聚成多肽鏈,解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。
  SDS-PAGE一般采用的是不連續(xù)緩沖系統(tǒng),與連續(xù)緩沖系統(tǒng)相比,能夠有較高的分辨率。
  濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區(qū)帶。當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩沖液,電極液選TRIS/甘氨酸。電泳開始后,HCL解離成氯離子,甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。蛋白質帶負電荷,因此一起向正極移動,其中氯離子最快,甘氨酸根離子最慢,蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率最大,超過蛋白,因此在后面形成低電導區(qū),而電場強度與低電導區(qū)成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動,形成以穩(wěn)定的界面,使蛋白聚集在移動界面附近,濃縮成一中間層。
  此鑒定方法中,蛋白質的遷移率主要取決于它的相對分子質量,而與所帶電荷和分子形狀無關。
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